刘澎教授：BTK抑制剂通过与BTK激酶活性中心C481半胱氨酸的共价结合，从而抑制BTK激酶活性，因此BTK抑制剂与BTK的结合率（BTK靶点占有率）可以作为反映BTK抑制剂对BTK抑制作用的PD生物标志物。BTK占有率的检测是采用ELISA法对人外周血单个核细胞（PBMC）中的BTK 进行相对定量测定，下面以奥布替尼（ICP-022）为例进行具体步骤的讲解：

1、将含有BTK的PBMC裂解液与BTK抑制剂奥布替尼一起孵育（试验组），将不加奥布替尼的作为对照组。再与 ICP-169（生物素标记的奥布替尼）进行孵育后加入到预先有链霉亲和素包被的孔板中。当奥布替尼与PBMC裂解液共同孵育时它会与BTK结合，从而阻止BTK与ICP-169的结合。该复合物因无法与孔板结合，因此响应信号难以产生。

2、兔抗BTK一抗与上述样品孵育将会与BTK结合，四甲基联苯胺（TMB）是抗兔二抗耦联的HRP 的底物，通过硫酸终止该反应，经显色后在450 nm波长下测定吸光值，620 nm可以作背景校正，游离BTK的含量与吸光值成正比，由此可以计算出游离BTK的含量（具体计算方法如下图），BTK占有率=100%-游离BTK（%）。

刘澎教授：伊布替尼是全球首个上市的BTK抑制剂，目前伊布替尼的获批剂量为420mg 每日一次（QD）和560mg 每日一次（QD），研究表明伊布替尼420mg QD剂量下，外周血单核细胞BTK占有率的中位水平为96-99%^【1】，患者个体间差异较大，部分患者BTK靶点占有率在80%以下，在给药后4~24h内BTK靶点抑制降低。560mg QD剂量下，患者在用药后4小时内BTK占有率可达到95%^【2】，用药24小时，部分患者BTK占有率在80%左右。 

全球第二个上市的BTK抑制剂是阿卡替尼，获批剂量为100mg 每日两次（BID）。阿卡替尼治疗CLL患者的一项2期临床试验，对48例复发/难治或高危初治的CLL患者进行了PBMC的BTK占有率检测，并评估了阿卡替尼100mg每日两次（BID）或200mg每日一次（QD）治疗CLL的安全性、疗效和药效学，研究结果显示，BID组和QD组给药后4小时外周血单核细胞的BTK占有率分别为95.3%和87.6%，P＜0.0001，ORR分别是95.8%和79.2%，2年PFS率分别为91.5%和87.2%^【3】，表明与QD组相比，BID组的BTK占有率更高，对相关通路的抑制性更强，疗效更佳。该研究侧面反映BTK靶点占有率越高，BTK抑制剂的疗效可能越好。

国内第二个上市的BTK抑制剂是泽布替尼，获批剂量为160mg 每日两次（BID），泽布替尼治疗B细胞恶性肿瘤的1期研究，对45例复发/难治性淋巴瘤患者进行了PBMC的BTK占有率检测，在推荐剂量160mg BID组中位BTK占有率＞95%^【4】。同样在这项研究中，取30例复发/难治性淋巴瘤患者的淋巴结活检标本，检测泽布替尼160mg BID 和 320mg QD两种给药方式对BTK靶点的抑制，结果显示产生完全BTK靶点抑制（>95%)的患者比例分别为89% vs 50%， P=0.0342， 所以泽布替尼后续的研究都选用160mg BID给药方式。

刘澎教授：奥布替尼是国内第三个上市的新型BTK抑制剂，获批剂量为150mg 每日一次（QD）。奥布替尼治疗复发/难治性MCL患者的多中心II期研究，对100mg BID组 和150mg QD组15例患者进行了PBMC的BTK占有率检测，结果显示奥布替尼100mg BID 和150mg QD 两个剂量组均能达到接近100%的靶点占有率，并且给药后4-24小时BTK占有率并未降低，且受试者间的差异很小。可见两种给药方式下奥布替尼对复发难治套细胞淋巴瘤患者PBMC均可持续24小时完全占有BTK（>99.6%）^【5】，疗效和安全性评估两组相当，考虑到奥布替尼150mg 每日一次用药能给患者带来更好的便利性和依从性，因此临床推荐150mg每日1次作为其给药方式。

综上所述，奥布替尼在推荐剂量下，对BTK靶点24h内接近100%稳态抑制，个体间差异小，给药后4h-24h内BTK靶点抑制未降低。而其他的BTK抑制剂，泽布替尼、阿卡替尼需要每日两次给药才能达到这个目的；伊布替尼虽为每日一次给药，但在获批剂量下，部分患者BTK靶点占有率在80%以下，给药后4h-24h内BTK靶点抑制会略有降低。

在传统BTK抑制剂分子结构基础上进行优化的奥布替尼，采用特殊的固体分散体制剂技术，提高了生物利用度，具有良好的PK/PD特性，在目前已上市的新型BTK抑制剂中是唯一采用每日一次给药的BTK抑制剂。

刘澎教授：关于在r/r CLL/SLL中的疗效，2020ASH大会报道，中位随访14.3个月：奥布替尼治疗r/r CLL/SLL患者（N=80）的总缓解率（ORR）高达91.3%，完全缓解率（CR）则达10%^【6】。泽布替尼治疗经治1 次CLL/SLL 患者的2 期注册临床研究显示，中位随访15.1个月，泽布替尼治疗r/r CLL/SLL患者（N=91）的总缓解率（ORR）为84.6%，完全缓解率（CR）则为3.3% ^【7】。伊布替尼CLL3002研究（n=106）^【8】、Resonate研究（n=195）^【9】分别显示，中位随访17.8个月和9个月，伊布替尼治疗r/r CLL/SLL患者的ORR分别为67.9%和86%，CR分别为3.8%和2%。阿卡替尼ASCEND研究显示，中位随访16.1个月，阿卡替尼治疗r/r CLL/SLL患者（n=155）的ORR为81%，CR为0%^【10】。以上这几个研究虽非头对头比较，但入组患者基线情况相似，可以看出奥布替尼治疗r/r CLL/SLL与其他BTKi相比，相似随访时间内达到完全缓解的患者比例更高。此外，Resonate研究更新了随访60个月的CR率为10.8%^【11】，可见奥布替尼中位随访14.3个月几乎达到传统BTKi5年随访的完全缓解率。